Ⅰ elisa實驗步驟和每步原理
ELISA酶聯免疫吸附實驗
1.原理：免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發生的高選擇性高特異性識別和結合原理，對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法，酶聯免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個部分組成：免疫識別，信號輸出和數據處理。
雙抗體夾心法：
①：抗體包被 在96孔板上包被抗體。由於酶標板是由聚苯乙烯製成，其含有的苯環與抗體的氨基酸殘基具有類似π-π堆積作用的引力，結合靜電和疏水作用，可以將抗體吸附於其表面。然後，將未吸附的抗體用緩沖液清洗後，加入含有明膠或牛血清蛋白（Bovine Serum Albumin, BSA）的封閉液以封閉酶標板上未結合抗體的部分。加入封閉液的目的，是防止其他蛋白因靜電或疏水作用吸附在96孔板上，造成假陽性信號，干擾後續實驗的進行。
②：免疫識別 在96孔板上包被抗體後，加入待測樣，並在37°C環境下孵育一段時間，通常是1-2小時。此時酶標板上的抗體與待測抗原進行特異性識別結合。此處抗體的質量是關鍵，好的抗體既能特異性高效地結合抗原又不受待測樣中其他生物大分子、蛋白質和無機鹽等成分的影響。
③：洗板 將未結合的抗原洗掉，加入該抗原所對應的識別抗體並在37°C下繼續培養1-2小時，接著將未連接上抗原的抗體洗掉。
④：酶標信號輸出 加入帶有辣根過氧化酶（Horseradish Peroxidase, HRP）標記的酶標二抗，用於和標准抗體結合。在培養30分鍾後洗掉未連接的二抗，並加入顯色劑顯色。根據顯色的結果判斷抗原的濃度。一般認為，抗原濃度與顯色後的發光強度呈正相關。
免疫競爭法
以抗原競爭抗體為例，在上述免疫夾心法操作步驟的第二步加入待測抗原後，立刻加入酶標抗原，使之與待測抗原競爭識別酶標板上的抗體。當待測抗原濃度越高，能夠連上酶標板上抗體的酶標抗體就越少，輸出的信號就越少。這樣待測樣濃度與酶顯色信號就呈逆相關。
Ⅱ elisa實驗原理是什麼呢
elisa實驗原理是由於抗原、抗體的反應在一種固相載體—聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育後，可通過洗滌除去多餘的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩定性。
在實際應用中，通過不同的設計，具體的方法步驟可有多種。即用於檢測抗體的間接法、用於檢測抗原的雙抗體夾心法以及用於檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。
elisa的實驗步驟
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml於上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時，洗滌。
(同時做空白、陰性及陽性孔對照)於反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml，37℃孵育30-60分鍾，洗滌，後一遍用DDW洗滌。
其餘步驟同「雙抗體夾心法」的4、5、6。正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證實驗結果的准確性。有時本底較高，說明有非特異性反應，可採用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
Ⅲ ELISA法的基本原理
它採用抗原與抗體的特異反應將待測物與酶連接，然後通過酶與底物產生顏色反應，用於定量測定。測定的對象可以是抗體也可以是抗原。
在這種測定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體（免疫吸附劑） ②酶標記的抗原或抗體（標記物）③酶作用的底物（顯色劑）
測量時，抗原（抗體）先結合在固相載體上，但仍保留其免疫活性，然後加一種抗體（抗原）與酶結合成的偶聯物（標記物），此偶聯物仍保留其原免疫活性與酶活性，當偶聯物與固相載體上的抗原（抗體）反應結合後，再加上酶的相應底物，即起催化水解或氧化還原反應而呈顏色。
其所生成的顏色深淺與欲測的抗原（抗體）含量成正比。 這種有色產物可用肉眼、光學顯微鏡、電子顯微鏡觀察，也可以用分光光度計（酶標儀）加以測定。其方法簡單，方便迅速，特異性強。